​BioRad ZE5 分析 19 色方案鉴定 PBMC 多个细胞亚群
来源:    发布时间: 2018-01-05 10:38   403 次浏览   大小:  16px  14px  12px
细胞生物学

细胞生物学的发展对流式细胞生物学方面的进展对流式细胞术提出了更高要求,需要仪器来执行准确的高维多色分析,更高的灵敏度和更大的分辨率来完成复杂的多重细胞分析测定。ZE5 流式细胞分析仪可配置 3~5 根激光器,同时检测 19~30 参数,能够成功地进行复杂的免疫分型。

ZE5 流式细胞分析仪

● 高端——5 激光 30 参数,大功率 Coherent 激光器提供高分辨率
● 灵活——自由切换,快速运行单管、40 管、96 孔和 384 孔板
● 高速——速度达 10 万事件/秒,一流的液流系统保证安静
● 智能——革新的 Everest 软件引导式涉及,染料自动匹配
 


摘要

使用 ZE5 流式细胞分析仪成功完成多种免疫细胞亚群的表型分析。使用正常健康供体来源的外周血单核细胞(PBMC)进行染色,鉴定 T 细胞,B 细胞,NK 细胞,树突状细胞和单核细胞。结果显示,该多色 panel 在 ZE5 上准确地补偿并且每个细胞亚群被很好地鉴定。

样本处理

将冷冻的 PBMC(AllCell)解冻成 PBS + 10% FBS,洗涤,并在 TC20TM 自动细胞计数器上计数(Bio-Rad Laboratories)。 细胞在 PBS 中洗涤两次,以 5×105 个细胞/孔种在 96 孔板中。 PBMCs 使用 Zombie UV Fixable Viability Kit 染色,室温避光 30 分钟。用 PBS + 1% BSA + 0.1% 叠氮化物溶液洗涤细胞两次,然后加 FC-block 4 ℃ 避光 30 分钟。 染色抗体混合物列表如表一:
 
 

PBMCs 免疫分型 

➤ T 细胞亚群分析

分析鉴定活细胞门控然后区分按大小和粒度区分细胞群,CD3+T 细胞成 CD3+ CD4+ 或 CD3+ CD8+ 亚群,调节性 T 细胞 (Treg) 被鉴定为 CD4+T 细胞且 CD25 hiCD127lo。 幼稚、记忆表型 (Tcm) 或效应记忆表型 (Tem) 在 CD4+ 和 CD8+ 基础上表达 CCR7 或 CD45RO 谱系标记(图 2)。
 
 

➤ B / NK / DC 细胞亚群分析

分析鉴定活细胞门控然后区分按大小和粒度区分细胞群。 T 细胞排除,门控在 CD3-(非 T 细胞)。B 细胞被鉴定为 CD19+ CD20+ 群体。NK 细胞被鉴别 CD3- CD19- CD20- 群体并表达 CD56,分为 CD56dim CD16+ 和 CD56bright CD16- 亚群。树突状细胞(DC)被鉴别 CD3- CD19- CD20- CD56- 群体并表达 HLA-DR。PDC 是 HLA- DR+ CD123+,MDC 是 HLA- DR+CD11c+(图 3)。
 
 

➤ 单核细胞分析

分析鉴定活细胞门控然后区分按大小和粒度区分细胞群。T 细胞,B 细胞和 NK 细胞通过选择 CD3- CD19- CD56- 群来除去。CD14+ CD33+ 双阳性的单核细胞可进一步区分为 CD16 hiHLA-DRhi 的促炎细胞(图 4)。
 
 

结论 
ZE5 流式细胞分析仪以优异的荧光灵敏度和多重分析参数可以用 19 色 panel 从 PBMC 样品中鉴定多个免疫细胞群体。

数据来源: Angie Green PhD, Kristin Lind PhD, Michelle Scott, and Kelly Kroeger PhD
Bio-Rad Laboratories, Life Science Group, 2000 Alfred Nobel Drive, Hercules, CA 94547
 
 

文中产品仅用于科研用途,不用于临床诊断
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